基本信息

1. 基因名称：Biotin-Protein Ligase；BirA Enzyme。

2. 蛋白质构建：大肠杆菌BirA基因序列；融合His Tag标签。

3. 来源：E.coli。

4. 表达宿主：E.coli（BL21 DE3）。

产品特性

1. 状态：无色透明液体。

2. 纯度：> 95 %，由SDS-PAGE测定。

3. 分子量：基因全长6345bp，理论分子量为38.5kDa。

4. 规格：20μg*2 vials。

5. 蛋白浓度：1.0mg/mL。

6. 产品成分：

产品成分	规格	储存体系
Biotin-Protein Ligase (1mg/mL)	20 μl×2 vials	50mM Imidazole, 50mM NaCl, 5%Glycerol, 5mM Mercaptoethanol, pH 6.8
10×Biotin Ligase Buffer A	1mL	0.5M Bicine, pH 8.3
10×Biotin Ligase Buffer B	1mL	100mM ATP, 100mM MgOAc, 500μM D-Biotin
D-Biotin	1mL(500μM)	500μM D-Biotin

技术指标

1. 反应体系：

反应物	体积	终浓度
10×Biotin Ligase Buffer A	2.5μl	1x
10×Biotin Ligase Buffer B	2.5μl	1x
Biotin Ligase	0.25μl	10ng/μl
蛋白（或多肽）底物	1nmol	40μM
ddH2O（灭菌蒸馏水）	up to 25 μl

总体积25μl，于30℃孵育30～40min使底物完全生物素化。

2. 注意事项：

• 为了保证快速完成生物素化，最好使用高浓度的底物（达到40μM），因为底物浓度越低，生物素化所需要的时间越长。例如，使用相同量的生物素连接酶，40 μM底物可以在30 分钟内完成生物素化，而4 μM底物则需要5 小时。如果需要在30 min内使4 μM底物完成生物素化，相同的底物量应加入10倍量的酶。
• 如底物蛋白（多肽）需保存在较低温度时，可适当降低反应温度并应延长酶促反应时间。
• 氯化钠（>100 mM）、甘油（>5% W/V）、硫酸铵（>50 mM）等许多常见的缓冲液成分会抑制生物素连接酶的活性。当底物蛋白（多肽）确有必要使用这些试剂时，应尽量降低浓度。
• 底物中可含有Tris（pH 8.0）， 最佳浓度为10 mM，不超过50 mM。

3. 稳定性和存储：

• 样品4℃冰袋运输。样品自收到之日起在-20°C至-80°C下稳定保存12个月。
• 开封后在-20°C至-80°C下稳定保存6个月。
• 建议将蛋白质等分成较小的量，以获得最佳储存效果。避免反复冻融循环。
• Ligase Buffer A、B 和D-Biotin 储存于-20℃，可反复冻融。

4. 用途：生物素标记蛋白。

SDS-PAGE

蛋白质背景

生物素连接酶(Biotin Ligase、BirA、EC 6.3.4.15)用于催化生物素化反应，能活化生物素形成生物素酰-5'-腺苷酸，将生物素特异地转移到生物素受体蛋白（如Avi Tag 融合蛋白）上，使蛋白生物素化。被生物素化的蛋白质可以通过与之有高亲和力的抗生物素蛋白或者链霉亲和素进行连接。